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WB试验之如何选择内参抗体
1、选择内参时，要考虑目标蛋白的定位、分子量，以及实验条件。例如，如果你在研究蛋白质修饰（PTM），记得选用未修饰的目标蛋白作为对照，确保结果的准确性。收藏这篇文章，让你的实验无惧挑战。对照选择同样重要，如STAT3与Actin的配合，研究组蛋白位点时，要选用相应的组蛋白内参。
2、在实践中，可能会遇到一些问题，如背景过高、阳性条带缺失或弱、条带位置不准确等。例如，背景过高的原因可能包括杂蛋白干扰或孵育条件不合适；条带问题可能是因为蛋白提取不足、抗体选择不合适或孵育时间不够。记得，适当调整实验条件，比如增加一抗浓度或优化孵育步骤，是解决这些问题的关键。
3、抗体的适用性WB所适用的一抗一般是线性位点的，ELISA线性或构象型抗体都可以使用。从另一个意义上讲，WB可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定，而Elisa不行。灵敏度 一般Elisa的灵敏度要远高于WB，这从一般酶标记物的使用浓度或待检样品的稀释度上就可以看出。
4、很正常。内参有证明蛋白样品没问题。没有目的带原因很多。目的蛋白是否表达量很低，因为内参表达是很高的。
5、可以。WB相比更加科学，容易被杂志接纳。但是血清中没有内参可以选择。是ELISA实验操作要简单很多。WB和ELISA的敏感性有所区别。虽然前者用ECL显色敏感度可达pg级，但不同的样品来源和抗体的质量，不能保证每次都到这个级别，而ELISA可以达到ng级。也就是说ELISA更适于丰度低的蛋白检测。
6、根据预期的蛋白大小选择适当的凝胶，并加载相同量的总蛋白至各通道。转印：将SDS-PAGE上的蛋白转移到PVDF或nitrocellulose膜上。封闭：使用非特异性的蛋白（如脱脂牛奶或BSA）阻止膜上未结合的部位。主抗体孵育：使用针对目标蛋白的特异性抗体孵育。
PCR的原理
1、原位PCR技术的基本原理，就是将PCR技术的高效扩增与原位杂交的细胞定位结合起来，从而在组织细胞原位检测单拷贝或低拷贝的特定的DNA或RNA序列。
2、PCR是技术过程，核酸分子杂交是这一技术的基础原理。PCR技术是建立在这一基础上的。
3、PCR原理：DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。
4、荧光实时定量PCR的基本原理有两个要点：首先是对PCR反应中的每一个循环的反应产物进行实时检测并记录下来；其次，用于检测PCR产物实时检测的荧光染料标记在一段可以与单链PCR产物（模板）特异性杂交的探针上，并且处于淬灭状态，只有当探针与模板特异性结合以后才有可能释放出荧光信号。
5、解释：CHIP-PCR的基本原理 CHIP-PCR技术结合了染色质免疫沉淀和聚合酶链反应的特点。在细胞内，蛋白质与DNA的结合是调控基因表达的关键因素之一。通过CHIP技术，我们可以捕捉到与特定蛋白质结合的DNA片段，这些片段很可能是调控基因表达的关键区域。
6、聚合酶链式反应（PCR）：在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，通过变性、退火、延伸等步骤，体外快速扩增出与母链模板DNA互补的子链DNA。热启动PCR通过在高温下释放酶修饰物激活DNA聚合酶，避免非特异性扩增。逆转录PCR将mRNA逆转录成cDNA，以此为模板进行PCR扩增，检测基因表达。
Abbkine抗体质量
1、abbkine抗体质量良好。其抗体的质量和性能经过了严格的检测与验证。 高品质原材料：abbkine抗体的生产采用高品质的原材料，保证了抗体的纯度和特异性。这意味着抗体能够准确地识别目标抗原，减少非特异性结合的可能性。
2、Abbkine提供了一系列高质量的抗体产品，专为内参蛋白检测和目的蛋白分析设计。这些抗体包括内参抗体，如GAPDH、β-actin、β-tubulin、COX IV、Histone H3和PCNA等，用于校准实验误差和验证实验步骤。
3、作为美国生产型品牌，Abbkine提供OEM服务，其价格经济实惠，质量可靠，且适用于WB实验。Abbkine的ECFP抗体提供多种包装规格，如605/50ul、1800/200ul、6020/1ml等，适合不同实验需求。对于经常进行ECFP免疫学检测的实验，Abbkine提供1ml大包装以及更大定制规格的ECFP抗体。
什么是内参基因?常用内参基因有哪些?
1、在分子生物学实验中，两者常作为内参使用，但有所侧重。内参GAPDH由于其广泛的表达和稳定的表达水平，常被用于研究基因表达的调控、蛋白质功能等方面。而-actin由于其作为细胞骨架的重要成分，在细胞生物学研究中更为常见，尤其是在研究细胞形态、运动、应力反应等方面。
2、内参的解释及特点：内参，即内部参照物，是从研究对象内部选择的参照标准。在相对定量中，内参用于比较样本内部的差异或变化。内参的选择通常基于研究对象本身的某些稳定特性或基因表达水平。使用内参进行相对定量的优势在于其简便性和实用性，无需额外的外部参照物。
3、CT值是用来衡量PCR扩增过程中荧光信号达到阈值所需的循环次数。对于表达量较高的基因，其CT值相对较低；而对于表达量较低的基因，其CT值相对较高。因此，当目标基因的CT值与内参基因相差显著时，表明目标基因的表达水平与内参基因有显著差异。
4、荧光素酶检测：将转染后的细胞加入到荧光素酶的底物荧光素溶液中。荧光素酶能够与荧光素底物反应，产生荧光。该荧光信号的强度与荧光素酶的活性成正比。荧光素酶报告基因的内参控制：实验中通常会同时转染一种稳定表达的荧光素酶基因（如Renilla荧光素酶基因），用作内参。
5、我想你说的“对照样品”应该是用于制作标准曲线的标准品（常用质粒构建的重组DNA），稀释4-5个梯度，可以做标准曲线。所谓双曲线，就是用这个所谓的“对照样品DNA”，一个用来做目的基因的标准曲线，一个用来做内参基因的标准曲线。2-△△C中处理前和处理后，我没有明白。
6、不要用同一阈值。内参和目的基因在分析的时候是独立进行的。分析量的时候，先比较内参（代表加样误差）。校正加样量的差别后，才能比较目的基因。配溶液的时候，先配成一个大管（除了样本以外的其他成分都混在一个大管内，如果有10个反应，配11份的量，这样可以留有余地）。
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