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本文目录一览：

• 1、LC3的WB一些问题求助大家
• 2、标志物LC3检测时需要注意的5大要点
• 3、自噬研究指南|干货篇:自噬检测方法详解
• 4、自噬标志物—LC3检测要点
• 5、lc3b与lc3ii区别
• 6、关于『细胞自噬』,发生机制、检测方法、研究思路,看这一篇就够了!_百...

LC3的WB一些问题求助大家

LC3-I与LC3-II的动态平衡是自噬活性的标志。进行LC3检测时，需注意以下要点：了解样本的LC3表达量和类型，确保实验成功。关注LC3-I和II的生成与降解动态，使用特定药物评估自噬改变。注意LC3抗体检测的抗原表位，避免误解自噬状态。确保LC3从膜上解离，电泳分离时选择适当浓度的胶和膜，确保准确的WB分析。

LC3抗体检测抗原表位位于LC3的N端，由于PE基团结合导致N端区域构象变化，抗体对LC3-II亲和性更高，LC3-II/ LC3-I 比值存在较大误差。LC3-I对反复冻融更为敏感，需用新鲜制备样品上样，以防止LC3-I检测不到。

Western blot检测通过检测与自噬小体膜结合的Atg8及其同源物的表达水平来评估自噬活性。LC3是最常用的自噬标记蛋白，其翻译后加工及脂化修饰被广泛研究。LC3在自噬形成时，从胞浆型LC3（LC3-I）转变为（自噬体）膜型（LC3-II），WB检测LC3-II/I比值的变化可以评估自噬的强弱。

lc3b与lc3ii区别：含义不同，性质不同。含义不同：LC3合成之后是前提LC3pro-LC3；立刻C末端被ATG4水解切割掉一段多肽，暴露甘氨酸，这个是LC3-I，胞浆分布。

标志物LC3检测时需要注意的5大要点

进行标志物LC3检测时需要注意的5大要点如下：了解样本的LC3表达量和类型：核心点：在进行LC3检测前，首先需要明确样本中LC3的表达量和存在的类型，这是确保实验成功的基础。关注LC3I和II的生成与降解动态：核心点：LC3I与LC3II之间的动态平衡是自噬活性的重要标志。

进行LC3检测时，需注意以下要点：了解样本的LC3表达量和类型，确保实验成功。关注LC3-I和II的生成与降解动态，使用特定药物评估自噬改变。注意LC3抗体检测的抗原表位，避免误解自噬状态。确保LC3从膜上解离，电泳分离时选择适当浓度的胶和膜，确保准确的WB分析。

避免反复冻融：LC3I的稳定性受到反复冻融的影响，需避免此操作。超声处理：细胞裂解后，短暂冰上超声有助于LC3从膜上分离，避免影响检测结果。电泳分离条件：高浓度分离胶：由于LC3I与LC3II的分子量差异微小，使用高浓度分离胶有助于准确分离。小孔径转印膜：同样为了保证准确分离，小孔径转印膜是首选。

LC3检测要点包括样本表达、特殊处理与药物抑制、结果分析、膜相关蛋白处理和小分子蛋白分析。样本表达上，LC3在不同组织细胞中有差异性表达，主要研究LC3A与LC3B，它们在大脑、脑内分泌组织中表达较高，其他组织表达较低。特殊处理与药物抑制是评估自噬程度的关键，需要观察药物作用下的自噬变化。

进行LC3检测时，首要任务是评估样本的表达类型和量。对表达量低或不表达LC3的样本，自噬研究的结论可能不准确。LC3的动态平衡是关键，自噬小体的生成、融合和降解需要通过药物干预（如氯喹、巴佛洛霉素A1）来观察。通过阻断溶酶体功能，可以观察在不同条件下的LC3-II积累和比值变化，判断自噬程度。

自噬研究指南|干货篇:自噬检测方法详解

自噬研究通常遵循清晰的研究思路，这有助于设计实验方案或查找参考文献。自噬检测方法主要有三种：电镜观察、Western blot检测和荧光蛋白标记检测。接下来，我们将逐一介绍这三种检测方法。电镜观察是直接观察自噬不同阶段形态变化的有效方法。透射电镜可提供自噬体的直观图像，初步判断自噬阶段，但无法进行定量检测。

细胞自噬研究始于1963年，比利时科学家Christian de Duve首次提出。自噬过程，即细胞的自我消化，通过自身降解途径，将无用杂质转化为营养物质，尤其在饥饿或化学刺激时，细胞质中形成隔离膜包裹待降解物，最终形成自噬体。溶酶体的外膜与自噬体膜融合，酸性水解酶启动降解过程，实现自噬目的。

研究自噬与疾病关联的常见思路和工具包括清晰的研究设计、电镜观察、Western Blot检测标志物、荧光显微镜下的自噬流检测等。汉恒生物作为国内自噬研究的先驱，提供了多种检测工具，如AAV-LC3和可定位细胞器的标记工具，用于深入研究。研究案例揭示了自噬在特定细胞和疾病中的作用。

首先，分子伴侣介导的自噬（CMA）主要通过HSC70分子伴侣识别具有KFERQ序列的底物，形成复合体并与LAMP2A结合。随后，底物在分子伴侣的帮助下被转运到溶酶体进行降解。在正常细胞和应激状态下，CMA活动尤为活跃，如饥饿、氧化剂暴露等都可能激活这一过程。

分子伴侣介导的自噬是一种通过分子伴侣识别特定蛋白质序列并引导其进入溶酶体降解的细胞调控途径。以下是关于分子伴侣介导自噬的详细解析：核心机制：CMA主要通过HSC70分子伴侣识别具有KFERQ序列的底物。这些底物与HSC70形成复合体后，会与溶酶体膜上的LAMP2A受体结合。

自噬根据细胞物质运到溶酶体的方式，分为大自噬、分子伴侣介导的自噬（CMA）、小自噬和内体微自噬。其中，大自噬由内质网来源的膜包裹待降解物，通过溶酶体降解。CMA则通过分子伴侣介导，选择性地清除可溶性蛋白质。小自噬和内体微自噬分别涉及长寿命蛋白和内体物质的降解。

自噬标志物—LC3检测要点

检测细胞自噬的金标准，尽管电镜能直观地揭示自噬体的存在，但其操作性限制了其广泛应用。而LC3，这个自噬过程中的关键标志物，成为了科学家们更为青睐的研究工具。LC3最初被发现与微管关联蛋白有关，但在深入研究后，与酵母蛋白Apg8/Aut7/Atg8的相似性揭示了其在自噬中的核心作用。

Western blot检测通过检测与自噬小体膜结合的Atg8及其同源物的表达水平来评估自噬活性。LC3是最常用的自噬标记蛋白，其翻译后加工及脂化修饰被广泛研究。LC3在自噬形成时，从胞浆型LC3（LC3-I）转变为（自噬体）膜型（LC3-II），WB检测LC3-II/I比值的变化可以评估自噬的强弱。

免疫定位自噬体和线粒体：利用免疫学技术，如免疫荧光染色，可以定位自噬体和线粒体，观察它们之间的相互作用。 使用线粒体自噬追踪探针：特定的线粒体自噬追踪探针可以帮助科学家更直接地观察线粒体自噬的过程。

检测方法： 透射电镜观察：用于观察亚细胞结构，直接观察自噬体的形态和数量。 双荧光穿梭质粒系统：用于检测自噬体膜的变化，通过荧光信号的强弱来判断自噬的活跃程度。 单荧光质粒系统和WB检测：通过检测LC3蛋白的动态变化来反映自噬的水平，LC3蛋白在自噬过程中起着关键作用。

Western Blot检测：通过Western Blot技术检测自噬相关蛋白的表达量，可以间接反映自噬的水平。LC3的剪切和p62的降解是自噬激活的标志。 基于Keima蛋白的检测：Keima蛋白是一种pH敏感的荧光蛋白，可以在自噬体与溶酶体融合后发生颜色变化，从而用于检测自噬体的成熟和降解过程。

荧光显微镜观察法则是利用了LC3蛋白作为自噬标记物的特性。LC3蛋白在自噬过程中的动态变化，如从LC3-I向LC3-II的转化，以及自噬体的形成和溶酶体的融合，都可以通过荧光标记进行实时监测。通过观察LC3荧光斑点的形成、转移和消失，研究人员可以追踪自噬过程的动态变化，实现对自噬发生的检测。

lc3b与lc3ii区别

1、lc3b与lc3ii区别：含义不同，性质不同。含义不同：LC3合成之后是前提LC3pro-LC3；立刻C末端被ATG4水解切割掉一段多肽，暴露甘氨酸，这个是LC3-I，胞浆分布。

关于『细胞自噬』,发生机制、检测方法、研究思路,看这一篇就够了!_百...

关于细胞自噬的全貌，这篇文章详尽解析了其发生机制、检测方法以及研究思路。自噬，简单来说，就是细胞内的“自我消化”过程，由溶酶体和自噬体共同参与，通过膜重排进行，涉及巨自噬、微自噬和介导自噬等不同类型。细胞通过自噬清除无用组织，保护自身，但过度自噬也可能带来问题。

检测方法： 透射电镜观察：用于观察亚细胞结构，直接观察自噬体的形态和数量。 双荧光穿梭质粒系统：用于检测自噬体膜的变化，通过荧光信号的强弱来判断自噬的活跃程度。 单荧光质粒系统和WB检测：通过检测LC3蛋白的动态变化来反映自噬的水平，LC3蛋白在自噬过程中起着关键作用。

自噬的调控机制依赖于自噬相关蛋白，如ATG蛋白，它们在自噬的不同阶段发挥调控作用。研究自噬可以通过使用自噬激动剂或抑制剂来促进或抑制其发生。自噬的检测方法包括透射电镜、双荧光穿梭质粒系统、单荧光质粒系统、WB检测等。这些方法帮助科学家们了解自噬的动态过程。

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